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黄连>>
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[组织培养]
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黄连根茎生长极为缓慢，一般4～5年才能采挖，虽然不断扩大生产，由于其生长周期长，市场仍然供不应求。为解决药源紧缺问题，对黄连进行组织培养研究也不断深入。我国学者也进行了较多的研究，如对不同生长季节的黄连外植体愈伤组织的诱导及其次生代谢产物的含量研究等。
一、愈伤组织的诱导
1.愈伤组织的形成
据报道，切取黄连根、根茎、叶柄、花梗等部位，接种在附加2，4-d0.5～1毫克/升(单位下同)的ms、b5、er、6，7-v和土豆等五种培养基上。经过1～2个月的培养，均诱导出了愈伤组织，但是5种培养基对黄连诱导愈伤组织的频率是不一致的。从结果看，以6，7-v表现最好，其次是er和土豆培养基，表现最差的是b5和ms。另外，不同外植体在同一培养基或者不同培养基中，对愈伤组织的诱导也有差异。花梗在er+2，4-d 0.5～1培养基上的愈伤组织诱导率最高，达77.78%，而且质量好，颜色鲜嫩，生长迅速。而嫩叶、叶柄的诱导率较低。
取黄连嫩叶，切成0.5厘米见方的小块，分别接入附加不同激素组合的ms和6，7-v四种培养基中。经培养，6，7-v+2，4-d 0.5+laa1.0+kt2.0和6，7-v+2，4-d 1.5+laa1.0+kt0.25的叶愈伤组织诱导率为61.75%和50.32%，ms+2，4-d 0.25+laa1.0+kt2和ms+laa0.2的叶愈伤组织诱导率为13.30%和0%。可见6，7-v基本培养基诱导黄连愈伤组织的效果优于ms。此外，叶外植体在ms+2，4-d1〔4〕和ms+2，4-d1+kt0.1的培养基上培养，均能诱导出愈伤组织。
2.再生植株的形成
黄连叶片外植体在ms+2，4-d 1培养基上很容易产生愈伤组织。愈伤组织在转入分化培养基ms+6-ba 0.5+naa1培养基上以后，能产生大量胚状体。胚状体可经过球形、心形、鱼雷形及子叶期等诸阶段发育成小植株。在此基础上，侯嵩生等人又进一步研究了叶愈伤组织-胚状体-再生植株的全过程。黄连叶愈伤组织转移至含有6-ba0.5+naa0.2的ms培养基中进行6～8代的暗培养，形成许多比较疏松、圆球形、表面呈颗粒状的愈伤组织。这些颗粒状愈伤组织逐渐分化发育成不同阶段的体细胞胚。体胚发生率达85%。若将体胚分别继代培养在6-ba1+naa0.2或2，4-d0.5+naa0.1的ms基本培养基上，暗光培养达3年之久，体胚仍然不断增殖并产生新的体胚。将一些具子叶、发育正常的体胚转入ms基本培养基上附加iba0.5+ga30.5进行光照培养，两星期后体胚即变绿并进一步发育成具芽及根的小植株。植株再生率在试管内可达90%以上。
二、愈伤组织的生长及其小檗碱含量分析
1.不同培养基的影响
在相同激素浓度(2，4-d0.5毫克/升)下，继代培养7代的愈伤组织在6，7-v培养基中生长最好，其次是er和b5，ms最差。继代培养10代之后，er培养基最好，ms次之。第12次继代培养，在er、ms、b5及土豆四种培养基上实验的结果，细胞生长量分别为3.1、2.5、1.6及1.5倍。芮和恺等人在研究不同培养基对愈伤组织的生长及小檗碱的含量影响中，也发现愈伤组织在6，7-v培养基上生长最好，b5培养基次之，而ms培养基最差，但小檗碱的含量以在b5培养基中最高(0.943%)。
2.不同激素的影响
在6，7-v培养基中，当kt0.1存在的情况下，提高2，4-d的浓度(2.5～5毫克/升)，能促进愈伤组织的生长，但抑制小檗碱的合成；在2，4-d 2.5存在的情况下，ba或增加kt的浓度均能提高愈伤组织中小檗碱含量。此外，naa有利于小檗碱的合成，在6，7-v+kt0.1+naa2.5的培养基中，小檗碱的含量则增加5倍以上，达2.86%。
3.呼吸量、季节变化、接种量及接种时期对黄连愈伤组织细胞生长的影响
黄连组织细胞在生长周期中，呼吸量最初随生长量的增加而增加，一定时间后呼吸量变化不大。经过多代培养和选择，季节的影响逐步减小。当接种量为100～190毫克时，细胞生长最好，培养40天，细胞生长量为接种量的16.4倍。延迟期取样接种与在对数生长向直线生长期取样接种比较，同样培养35天，前者细胞生长量为接种量的5.52倍，后者为7.10倍。如果到减慢期取样接种，虽然生长量仍有所增加，但培养时间长，经济不合算。
4.不同剂量的60co γ射线辐照的影响
当中国黄连叶片愈伤组织培养至4代日龄为40日时，将其分成5组，每组5瓶。除对照组外，分别用5、10、20、40gy的60co γ-射线辐照(以辐照剂量率1gy/min计算)，辐射后转入生化培养箱与对照组一起继代培养，各种培养条件如培养基、激素浓度、培养湿度等都是一致的。每4周转接1次，当转接到第4代日龄为40日时分别测定生长速度和小檗碱含量。
从中可以看出，中国黄连叶片愈伤组织对不同剂量γ-射线的反应不同。低剂量的γ射线辐照(5gy)能促进愈伤组织的生长，并明显地增加小檗碱含量。当γ-射线的辐照剂量上升到10gy时，愈伤组织生长速度低于对照，但小檗碱含量仍然明显地高于对照。辐射剂量为20gy时愈伤组织的生长速度和小檗碱含量都显著地超过对照。
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[黄连药材的鉴别]
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一、性状鉴别
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1.味连
根茎多分枝，数枝丛生成簇，似倒鸡爪形。单一根茎稍弯曲，长3～6厘米，以长4厘米左右为多，直径0.3～0.8厘米。表面粗糙，黄褐色，有间断横纹及呈连珠状的结节，残留未去净的须根硬而刺手，在数枝根茎簇生合抱的中间，常有未除净的须根，单枝根茎的中段偶见光枝状茎枝，习称为“过桥”，顶端芦状处常有鳞叶片残留。质坚实而硬，折断面外围一圈棕黄色(皮部)，内层金黄色至红黄色(木部)，有放射状纹理，中央为红棕色髓部，偶显中空。气微，味极苦。
2.雅连
根茎为单枝，间有分为两枝者，呈两端为结节状粗大根茎，中间为光枝“过桥”，两头膨大中间细。全条雅连长5～8厘米，结节状根茎长1.5～3厘米，直径0.5～1厘米，中间的光枝“过桥”粗仅0.3厘米左右。结节状根茎略似蚕形，表面黄棕色至黄褐色，有较多残留短而硬的须根，握之刺手。质坚硬，断面皮部黄棕色，木部金黄色，有菊花心纹，中央有细小的髓或中空。光枝的“过桥”表面光滑，黄色，断面中空。气微，味极苦。
3.云连
单枝，不分枝，条细而弯曲似钩状，伸展长3～6厘米，直径0.2～0.4厘
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黄连 rhizoma
coptidis
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米。全体具细结节，似连珠状。光云连表面光滑，黄色，形如“蝎尾”；毛云连表面黄褐色，有较多的残留鳞叶和须根，顶端还有较长的叶鞘，整体类似“小虾”形状。质坚硬，折断面深黄色，有菊花心纹理，少数中央呈小孔状中空。气微，味极苦。
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4.峨眉野连
本品采收加工时常留有一段叶柄，以作鉴别。性状为根茎粗大，不分枝，稍弯曲似蚕形，无过桥光枝，根茎长4～10厘米，直径0.5～1厘米，表面黄绿色至绿黑色，残留须根极硬，鳞叶呈“盔甲”状，较硬而明显，顶端常带有2～4枚叶柄，长约7～10厘米，习称“龙头凤尾”。根茎断面菊花心纹明显，色深黄。味极苦。
5.野生黄连
根茎呈连珠状，弯曲，无过桥，大多残留有较多须根及鳞叶片，表面黄褐色，一般长4～8厘米，直径0.3～0.6厘米，质坚硬，断面金黄色至黄绿色，味极苦。
黄连应以条大，根茎长，无过桥或过桥短细，去净毛须鳞叶，表面黄色或黄褐色，断面金黄色，味极苦者为佳。条瘦，光枝长，结节根茎短细，带毛须鳞叶，色暗黄者为差。
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二、理化鉴别
1.根茎折断面在紫外光灯下观察显金黄色荧光，木质部尤为显著。
2.取黄连细粉1克，加甲醇10毫升，置水浴上加热至沸腾，放冷，滤过。①取滤液5滴，加稀盐酸1毫升与漂白粉少量，显樱红色；②取滤液5滴，加5%没食子酸乙醇溶液2～3滴，置水浴上蒸干，趁热加硫酸数滴，显深绿色。
3.取粉末或切片，加稀盐酸或30%硝酸1滴，片刻后镜检，可见黄色针状结晶簇，加热结晶显红色并消失。(小檗碱的盐酸盐或硝酸盐)。
4.薄层层折。取粉末0.1克，加甲醇5毫升，密塞，振摇30分钟，滤过，滤液供点样用。吸取样品滤液，与盐酸小檗碱及盐酸巴马汀标准品的混合溶液(每微升含盐酸小檗碱及盐酸巴马汀各0.5微克)，分别条状点样于同一硅胶g薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)展开10cm，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视，小檗碱和巴马汀斑点均显黄色荧光，供试品溶液在相应的位置上显相同的荧光条斑。
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黄连显微鉴别 |
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[商品规格]
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黄连商品因产地及加工不同，大致分为川连(味连、鸡爪连)、雅连(峨嵋连)、野连(凤尾连)、云连、土黄连。习惯认为雅连、川连品质好。
川连、雅连以身干、肥壮、连珠形、无残茎毛须、性坚体重、断面红黄者为佳。云连以身干、条细紧、曲节多、须根少、色黄绿者为佳。野连、土连以身干、色黄褐、无梗、无泥土杂质者为佳。每个品别均分为一、二等。
味连
一等：多聚成鸡爪形，少有单枝，表面黄褐色，间有过桥，但长不超过2cm。质肥壮坚实，易折断，断面金黄色或黄色。味极苦。无短于1.5cm的碎节、残茎。
二等：条较一等瘦小，有过桥，但长不超过2cm，间有碎节、碎渣、焦枯，余用一等。
雅连
一等：单枝，圆柱形，略弯曲，粗壮，过桥少，长不得超过2cm，质坚硬，表面黄褐色，断面金黄色，味极苦。
二等 ：条较一等瘦小，过桥较多，间有碎节，毛须，焦枯。余同一等。
云连
一等：单枝，圆柱形，微弯曲，顶端有些褐绿色鳞片，残叶。条粗壮，质坚实，直径在0.3cm。表面黄棕色，断面金黄色，味极苦。
二等：条较瘦小，间有过桥。表面金黄色。直径在0.3cm以下。余同一等 。
本品出口，按其品质优劣分等出售。
味连和雅连以身干，粗壮，连珠形，无残茎毛须，体重质坚，断面色红黄者为佳；云连以身干，条细坚实，曲节多，须根少，色黄绿着为佳。
按我国药典(2000年版)规定：本品按干燥品计算，生物碱以盐酸小檗碱计，不得少于3.6%；总灰分不得过5%。
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